第1个回答 2020-12-20
怎么在NCBI里面找到目的基因的CDS
提取细胞总RNA然后用试剂盒反转录成cDNA,用cDNA作为模板扩增基因的CDS区,然后想要转染进细胞中。比如MYOD1基因,首先在NCBI找到它的mRNA序列,然后找到它的CDS序列,全部复制下来,在primer 5.0 中。正向引物直接从CDS的第一个核酸开始(比如18bp),反向引物从CDS最后一个核酸开始,向前选择序列(比如17bp),调节2个引物的长度(不一定要一致),尽量避免错配,二聚体,产生错的产物即可。最后在引物的5‘端添加酶切位点以及保护碱基。