氨基酸离鉴定——纸层析 ,实验目 掌握氨基酸纸层析原理,析待 测品氨基酸. 二,实验原理 纸层析滤纸惰性支持物配层析.滤纸纤维羟基具亲水性,吸附层水作固定相,机溶剂流相.机相流经固定相,物质两相间断配离. 溶质滤纸移速度用Rf值表示: Rf=原点层析斑点距离/原点溶剂前沿距离 定条件某种物质Rf值数.Rf值与物质结构,性质,溶剂系统,层析滤纸质量层析温度等素关.本实验利用纸层析离氨基酸. 三,实验器材 (1)烧杯(5000mL):1/组 (2)微量注射器(100 L):1/ 组. (3)喷雾器:公用. (4)培养皿:1/组. (5)层析滤纸(22cm,宽14cm新华号滤纸):1张/组. (6)直尺,铅笔:自备. (7)电吹风:1/组. (8)托盘,针,白线:1套/组. (9)手套:1双/组. (10)塑料薄膜:公用. (11)烧杯:50mL,1/组. 四,实验试剂 (1)扩展剂:4体积丁醇1体积冰醋酸放入液漏斗,与5体积水混合,充振荡,静置层,弃层水层. (2)氨基酸溶液:0.5%已知氨基酸溶液3种(赖氨酸,苯丙氨酸,缬氨酸),0.5%待测氨基酸液1种. (3)显色剂:0.1%水合茚三酮丁醇溶液. 实验试剂 五,实验操作 检查培养皿否干燥,洁净;若否,其洗净并置于干燥箱内120℃烘干. (1)平衡:剪块塑料薄膜铺桌面,层析缸或烧杯置于塑料薄膜,再盛约20mL展层溶液烧杯置于倒置层析缸或烧杯,用塑料薄膜密封起,平衡20min. (2)规划:带手套,取宽约14cm,高约22cm层析滤纸张.纸端距边缘2cm处轻轻用铅笔划条平行于底边直线A,直线做4记号,记号间间隔2cm,原点位置.另距左边缘1cm处画条平行于左边缘直线B,B线A,B两线交点原点标明刻度(厘米单位),参见左图. (3)点:用微量注射器别取10mL左右氨基酸品(每取前都要用蒸馏水洗涤微量注射器,免交叉污染),点四位置.挤滴点,同位置需点2～3,2～3mL/,每点完点,立刻用电吹风热风吹干再点,保证每点纸扩散直径超3mm.每须点4,其3已知,1待测品. (4)层析:用针,线滤纸缝筒状,纸两侧 边缘能接触且要保持平行,参见图3-3.向培养皿加入扩展剂,使其液面高度达1cm左右,点滤纸筒直立于培养皿(点端,扩展剂液面A线约1cm),罩烧杯,仍用塑料薄膜密封.扩展剂升A线始计,每隔定间测定扩展剂升高度,填入表3-1.升15～18cm,取滤纸,剪断连线,立即用铅笔描溶剂前沿线,迅速用电吹风热风吹干. (5)显色:用喷雾器通风厨向滤纸均匀喷0.1%茚三酮丁醇溶液,立即用热风吹干,即显各层析斑点,参见左图. (6)计算各种氨基酸Rf值,并判断混合品都哪些氨基酸,各自实验结贴实验报告,见表3-2. (7)层析间横坐标,扩展剂升高度纵坐标画图,求扩展剂升18cm所需要间. (8)微量注射器内外用蒸馏水清洗干净,倒掉用展层液平衡液,培养皿洗净,整理桌面仪器试剂
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第1个回答 2017-10-20
应该细说溶解度与极性疏水性关：极性越迁移率越,疏水性越迁移率越（要求要记住各氨基酸结构式）亮氨酸R基非极性基团精氨酸含带电荷胍基极性所亮氨酸迁移速率于精氨酸
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